ABSTRACT
Resumen La enfermedad fungosa más limitante del duraznero (Prunus pérsica, L. Batsch) en Colombia es la pudrición parda, Monilia spp., que afecta flores, brotes y frutos, causando pérdidas hasta del 80%. El objetivo de la investigación fue identificar el patógeno asociado a pudrición parda en cuatro variedades: Dorado, Rubidoux, Diamante y Rey negro en el departamento de Boyacá. El estudio inicio con la colecta de frutos enfermos en Jenesano, Paipa, Tuta, Sotaquirá y Nuevo Colón. En laboratorio se realizó la obtención, aislamiento y purificación de los hongos presentes. Se realizó también caracterización morfológica de las colonias y conidias sobre cultivos monospóricos y caracterización molecular mediante amplificación por PCR del ADN ribosomal empleando iniciadores ITS4 e ITS5. Se obtuvieron 32 aislamientos del género Monilia y se identificaron tres especies presentes en la zona muestreada: Monilia fructícola, Monilia fructígena y Monilia laxa, en 62,5%, 25% y 12,5%, respectivamente. En la amplificación de la región ribosomal se observaron diferencias entre las dos primeras especies, en el tamaño de las bases amplificadas, siendo M. fructicola de 550 pb y M. fructigena de 545pb. Este trabajo contribuye a la caracterización de las especies de Monilia que afectan al duraznero en varias regiones del departamento de Boyacá.
Abstract The most limiting fungal disease in peach crop (Prunus pérsica, L. Batsch) in Colombia is brown rot, Monilia spp., that affects flowers, buds and fruits, with economic losses of up to 80%. The objective of this work was to identify the pathogen associated with the brown rot in four varieties: Dorado, Rubidoux, Diamante and Rey Negro in Boyacá department. The study started collecting symptomatic fruits in Jenesano, Paipa, Tuta, Sotaquirá and Nuevo Colón. In laboratory were obtained, isolated and purified the fungi present. Also morphological characterization of colonies and conidia were done on monosporic cultures and molecular characterization through PCR amplification of the ribosomal DNA using ITS4 and ITS5 primers. It were obtained 32 isolates of Monilia and three species were identified in the sampled area: Monilia fructícola, Monilia fructígena and Monilia laxa, in a 62.5%, 25% and 12.5%, respectively. In the amplification of the ribosomal region, differences could be observed between the first two species, in the size of the amplified bases, being M. fructicola of 550 bp and M. fructigena of 545 bp. This work contributes to the characterization of the Monilia species that affect the peach tree in several regions of Boyaca's department.
Resumo O mais limitante pêssego doença fúngica (Prunus persica L. Batsch) na Colômbia é o da podridão castanha, Monilia spp., Afectando flores, botões e frutos, causando uma perda de até 80%. O objetivo da pesquisa foi identificar o patógeno associado à podridão parda em quatro variedades: Dorado, Rubidoux, Diamante e Rey negro no departamento de Boyacá. O estudo começou com a coleta de frutas doentes em Jenesano, Paipa, Tuta, Sotaquirá e Nuevo Colón. No laboratório foi realizada a obtenção, isolamento e purificação dos fungos presentes. Caracterização morfológica das colónias e conídios em culturas de esporos e caracterização molecular também foi realizado por amplificação por PCR utilizando iniciadores de ADN ribossomal e ITS4 ITS5. 32 isolados foram obtidos género Monilia e três espécies presentes na área amostrada identificado: Monilia fructicola Monilia laxa, Monilia fructigena e em 62,5%, 25% e 12,5%, respectivamente. Na amplificação da região ribossomais diferenças entre as duas primeiras espécies que foram observados no tamanho das bases amplificados, sendo 550bp M. fructicola e M. fructigena de 545pb. Este trabalho contribui para a caracterização das espécies de Monilia que afetam o pessegueiro em diversas regiões do departamento de Boyacá
ABSTRACT
The Andean weevil Premnotrypes vorax represents an important cause of damage to Colombian potato crops. Due to the impact of this plague on the economy of the country, we searched for new alternatives for its biological control, based on the entomopathogenic bacteria Bacillus thuringiensis. A total of 300 B. thuringiensis strains obtained from potato plantations infested with P. vorax were analyzed through crystal morphology, SDS-PAGE, PCR and bioassays. We used site- directed mutagenesis to modify the Cry3Aa protein. Most of the B. thuringiensis isolates had a bipyramidal crystal morphology. SDS-PAGE analyses had seven strains groups with σ-endotoxins from 35 to 135 kDa. The genes cry 2 and cry 1 were significantly more frequent in the P. vorax habitat (PCR analyses). Three mutant toxins, 1 (D354E), 2 (R345A, ∆Y350, ∆Y351), and 3 (Q482A, S484A, R485A), were analyzed to assess their activity against P. vorax larvae. Toxicity was low, or absent, against P. vorax for isolates, wild type cry 3Aa and cry 3Aa mutants. The genetic characterization of the collection provides opportunities for the selection of strains to be tested in bioassays against other insect pests of agricultural importance, and for designing Cry proteins with improved insecticidal toxicity. Rev. Biol. Trop. 57 (4): 1235-1243. Epub 2009 December 01.
El gorgojo andino Premnotrypes vorax es una causa importante de daño en los cultivos colombianos de este tubérculo. Debido al impacto que esta plaga tiene sobre la economía del país, nos interesamos en buscar alternativas nuevas para el control biológico de P. vorax, basadas en la bacteria entomopatógena Bacillus thuringiensis. Se recolectaron un total de 300 cepas de B. thuringiensis a partir de plantaciones de papa infestadas con P. vorax, las cuales fueron analizadas por medio de la morfología del cristal, SDS-PAGE, PCR y ensayos biológicos. La mayoría de los aislamientos de B. thuringiensis presentaron cristales bipiramidales. Los análisis de SDS-PAGE indicaron la presencia de siete grupos de cepas con σ- endotoxinas que variaban entre 35 a 135 kDa. Las pruebas con PCR demostraron que los genes cry 2 y cry 1 fueron significativamente más frecuentes en el medioambiente de P. vorax. Además, se utilizó la mutagénesis sitio-dirigida para modificar la proteína Cry3Aa. Se analizaron tres toxinas mutantes, 1 (D354E), 2 (R345A, ∆Y350, ∆Y351), y 3 (Q482A, S484A, R485A), para determinar su actividad contra larvas de P. vorax. Los ensayos de toxicidad señalaron escasa, o nula, actividad hacia P. vorax tanto para las cepas, la toxina Cry3Aa de referencia y las proteínas Cry3Aa mutantes. La caracterización genética de la colección puede proveer oportunidades para la selección de cepas que pueden evaluarse por medio de bioensayos contra otros insectos-plaga de importancia agrícola, y para el diseño de proteínas Cry con actividad toxica mejorada.